1.AMAÇ
Baryum
klorür ile sodyum sülfatın reaksiyonu sonucu baryum sülfatın konsantrasyonu ile
bulanıklık şiddetinin arttığını gözlemlemektir.
2.TEORİK
BİLGİ
Nefelometri, bir çözeltinin bulanıklık derecesini
bulanık ortama 90o’lik açı ile gelen ışığın difraksiyonunu ölçme
suretiyle, bulanıklığı oluşturan maddenin konsantrasyonunu tayin yöntemidir.
Türbidimetri, bir çözeltinin bulanıklık
derecesini bulanık ortama 90o’lik açı ile gelen ışığın çözeltiden
geçen miktarını(ışığın absorpsiyona uğramayan kısmı ve difraksiyon ışığının bir
kısmı) fotometre ile ölçme suretiyle, bulanıklığı oluşturan maddenin
konsantrasyonunu tayin yöntemidir.
2.1.TÜRBİDİMETRİ
Türbidimetri, partikülün bulunduğu
süspansiyondan geçen ışığın ölçümüdür. Işığın geçirgenliğindeki (transmittans)
azalmanın ölçümünü yapar. Çoğunlukla detektör olarak spektrofotometre
kullanılır. Türbidimetri 90°lik ışık kırınımını kullanır.
Genel
olarak, tüm modern türbidimetreler nefelometrik ölçüm prensiplerini
kullanırlar. Türbidimetreler, özellikle, gelen ışığa göre 90 derece açı yapan
ışık kırınımını ölçerler. Bu türbiditeyi göstermektedir. Bu açının örnekteki
partiküllerce ışık kırınımına çok duyarlı olduğu sayılmaktadır.
2.1.a.Türbidite
I = I0 e-bt t = 1 / b ln
Io / I
t:
türbidite
b:
partikül solüsyonundan geçen ışığın yolunun uzunluğu
Şekil 1: Türbidimetrenin şematik olarak çalışma prensibi
2.1.b.Türbidimetrinin
kullanım alanları
Mikrobiyoloji
analizörlerinde bakteri kültürlerinde büyümenin izlenmesi, Koagülasyon
analizörlerinde küvet duvarında oluşan fibrin depolarının belirlenmesi,
Biyolojik sıvılarda (idrar, BOS, vücut kavite sıvıları gibi) protein içeriğinin
belirlenmesi gibi alanlarda kullanılır.
2.2.NEFOLOMETRİ
Nefelometri,
çözeltide süspansiyon halinde bulunan bir partikül tarafından saçılan ışığın
ölçümünü yapar. Sensitif bir detektör kullanımı gerektirir. Işığın absorpsiyonu
ve yansıması ihmal edilmelidir(Kalibrasyon). Spesifik proteinler için
immunonefelometri geniş bir deteksiyon sınırına sahiptir. Türbidimetriden de
daha iyi duyarlılığa sahiptir.
Nefelometri,
çeşitli açılarda saçılan ışığın bölümlerini detekte eder. Bu yöntemin
sensitivitesi blank veya background saçılımın olmamasına bağlıdır. İdeal olarak
saçılım yapacak partiküllerin yokluğunda hiçbir ışık detekte edilmemelidir.
Şekil 2: Nefolometrenin şematik olarak çalışma prensibi
2.2.1.Nefolometride dalga boyu seçimi
Saçılım prensibine
göre, saçılan ışığın şiddeti dalga boyu kısalığı ile doğru orantılıdır.
Immunolojik reaksiyonların çoğu serum protein reaksiyonlarını kullanır. Buna
göre;
λ<300
nm; proteinler max. abs. yaparlar
λ:400-425
nm; serumdaki porfirinler max. abs.
yaparlar
Uygun
dalga boyu aralığı: 320-380nm veya
500-650 nm arasındadır.
2.2.2.NEFOLOMETRİNİN
TEMEL BİLEŞENLERİ
- Işık kaynağı
- Lazer: - büyük sinyal
- kollimatöre gerek
yoktur
- partikül boyutundaki
dalgalanmalara çok duyarlıdır.
- Lambalar: - band enini genişletir
- sinyaller partikül
boyutu ile orantılıdır
- kinetik ve hız
ölçümlerine daha uygundur
Orta basınçlı Hg-arc lambaları, basit
düşük voltaj tungsten lambaları, ışık emisyon diyotlardır.
Nefelometrik
ölçümler düşük konsantrasyonlarda daha yüksek duyarlılığa sahiptir.
2.2.3.KİNETİK
NEFOLOMETRİ
Pik için
gerekli süre <1-2 dakikadır. Reaksiyon hızı antijen ve antikor
konsantrasyonları ile onların affinite ve aviditelerine bağlıdır. Lineer
değildir. Yüksek affinite ve aviditeli antisera gerektirir. pH, tampon ve
polimer ilavelerine çok duyarlıdır. Konvansiyonel lambalar band enini
genişletir. Lazerlerden daha üretkendir (lazerler immun kompleksinin
boyutlarındaki değişikliğe deha duyarlıdır).
3.DENEYİN
YAPILIŞI
0,025
gr sodyum sülfat alındı ve 250 ml’lik behere konuldu. Üzerine 250 ml saf su
konuldu ve su numunesi hazırlanmış oldu. Başka bir behere ise 0,025 gr baryum
klorür alındı ve 100 ml saf su konuldu. Çözeltilerimizi hazırlamış oldu. Daha
sonra baryum klorür çözeltisinden 100 ml’lik beherlere 1 ml, 2 ml, 4 ml ve 8 ml
alındı ve su numunesi ile 50 ml’ye tamamlandı. Oluşan yeni çözeltilerin
konsantrasyonunu ölçmek için nefolometreye konuldu. Alınan sonuçlar
doğrultusunda baryum sülfata karşı baryum klorür grafiği çizildi. Bu grafiğin
eğim formülünden yaralanarak bilinmeyen çözeltinin konsantrasyonu hesaplandı.
Deney
sırasında gerçekleşen reaksiyon;
4.SONUÇLAR
Tablo 1: Nefolometreden okunan BaSO4(k) değerleri
BaCl2
(ml)
|
BaSO4
(mg/L)
|
0
|
0
|
1
|
0,51
|
2
|
12,25
|
4
|
58,5
|
8
|
126,0
|
bilinmeyen
|
46,15
|
5.GRAFİKLER
Grafik-3: BaSO4(k)’a karşı
BaCl2 grafiği
6.HESAPLAMALAR
- Grafik 3’teki denklem: y = 16,881x - 11,19
- Bilinmeyen çözeltideki BaSO4(k) : 46,15 (mg/L)
y
= 16,881x - 11,19
46,15
= 16,881x - 11,19
x
= 3,40 ml ………………………… BaCl2 miktarı
- Bilinmeyen çözeltideki BaCl2 miktarı:
3,40 ml
Hiç yorum yok:
Yorum Gönder